Продукциялар

Башка оң тилкелүү РНК вирустарына окшоп, томбусвирустар мембрана менен байланышкан вирустук репликаза комплекси (VRC) тарабынан репликацияланат.VRC p92 вируска коддолгон РНКга көз каранды РНК полимеразадан (RdRp), вирустук p33 РНК шаперонунан жана бир нече биргелешип тандалып алынган хост протеиндеринен турат.Которулгандан кийин функционалдык RdRp болуу үчүн, p92 репликация протеин VRCге кошулуп, андан кийин аны активдештирүү керек.Биз мурда клеткасыз ачыткы экстрактысына негизделген анализде Tomato bash stunt virus (TBSV) RdRp активдештирүү үчүн эрүүчү хост фактору(лар) керек экенин көрсөткөнбүз.Бул макалада биз уюлдук жылуулук шок протеин 70 (Hsp70) N-терминалдуу кесилген рекомбинантты TBSV RdRp активдештирүү үчүн талап кылынган кооптуу хост фактору катары аныктайбыз.Кошумчалай кетсек, Hsp70 функциясын чакан молекулага негизделген блокировка in vitro RdRp tombusvirus тарабынан РНК синтезин тоскоол кылат.Андан тышкары, биз нейтралдуу фосфолипиддер, атап айтканда, phosphatidylethanolamine (PE) жана phosphatidylcholine (PC), RdRp активдештирүү in vitro күчөтөт.Ал эми, phosphatidylglycerol (PG) in vitro RdRp жандантуу боюнча күчтүү жана басымдуу ингибитордук таасирин көрсөтөт.Биз ошондой эле PE жана PC RdRp-вирустук плюс-спирт РНКнын [(+) РНК] өз ара аракеттенүүсүн стимулдаштырарын көрсөтөбүз, ал эми PG вирустук РНКнын RdRp менен байланышын бөгөттөйт.Томбусвирус RdRp активдештирүүдө ар кандай фосфолипиддердин стимулдаштыруучу жана ингибитордук ролуна таянып, биз инфекциянын жүрүшүндө жаңы VRC жыйындысын жөнгө салуу үчүн максаттуу субклеткалык мембраналардын липиддик курамын томбусвирустар колдонсо болорун сунуштайбыз. Вируска коддолгон РНКга көз каранды РНК полимераза (RdRp), ал бир нече оң тилкелүү РНК вирустарынын инфекцияланган клеткаларында вирустук РНК тукумун синтездөө үчүн жооп берет, алгач активдүү эмес.Бул стратегия цитозолдо вирустук РНК синтезинен качышы мүмкүн, бул РНК тарабынан ишке ашырылган клеткалык антивирустук реакциялардын индукциясына алып келет.Мембрана менен байланышкан репликаздык комплексти чогултуу учурунда вирустук RdRp толук эмес түшүнүктүү процесс аркылуу активдешет, бул RdRpди РНК синтезине жөндөмдүү кылат.TBSV RdRp колдонуу менен, биз чогуу тандалып алынган уюлдук Hsp70 чаперону жана нейтралдуу фосфолипиддер RdRp активдештирүүнү in vitro шарттаарын көрсөтөбүз.Ал эми, фосфатидилглицерин (PG) in vitro RdRp активдештирүүсүнө жана RdRp-вирустук РНКнын өз ара аракеттенүүсүнө үстөмдүк кылуучу ингибитордук таасирге ээ, бул RdRpди курчап турган мембраналык микродомен анын РНК синтези үчүн жөндөмүнө чоң таасирин тийгизет деп болжолдойт.Ошентип, вирустук RdRp активдештирүү, кыязы, жуккан клеткалардагы бир нече хост компоненттеринен көз каранды.