Продукциялар

Протеомдук фосфорлануу окуяларын талдоо протеиндик фосфорлануу тармактарынын эбегейсиз татаалдыгынан дагы эле негизги аналитикалык көйгөй болуп саналат.Бул иште биз Lys-N, Lys-C жана трипсиндин толуктоочулугун алардын фосфопротеомдун глобалдык анализине салым кошуу жөндөмүнө карата баа беребиз.Төмөн pH күчтүү катион алмашуунун тазаланган версиясы N-терминалдык ацетилденген, фосфорланган жана модификацияланбаган пептиддерди эффективдүү бөлүп алуу үчүн колдонулган.Жалпысынан 5036 ашыкча фосфопептиддер үч ферменттин айкалышынын жардамы менен 1 мг белоктун <1% жалган ачылышы менен аныкталышы мүмкүн.Биздин маалыматтар ар кандай протеазалар менен түзүлгөн phosphopeptide маалымат топтомдорунун ортосундагы кайталануу маргиналдуу экенин көрсөттү, ал эми эки окшош түзүлгөн триптикалык маалымат топтомдорунун ортосундагы кайчылаш кеминде 4 эсе жогору экени аныкталган.Ушундай жол менен, Lys-N жана трипсинди параллелдүү колдонуу бир гана трипсинге салыштырганда аныкталган фосфопептиддердин санын 72% га көбөйтүүгө мүмкүндүк берди, ал эми трипсинди репликациялоо эксперименти 25% гана көбөйүүгө алып келди.Ошентип, трипсин жана Lys-N маалыматтарына гана көңүл буруп, биз 4671 ашыкча эмес фосфопептиддерди аныктадык.Табылган сайттарды андан ары талдоо Lys-N жана трипсин маалымат топтомдору бир кыйла ар түрдүү фосфорлануу мотивдери менен байытылганын көрсөттү, бул фосфопротеомдук анализдерде мультипротеаздык ыкмалар абдан баалуу экендигин дагы бир жолу далилдеди.