Продукциялар

Антранил кислотасы жана флуоресценцияны аныктоо менен дериватизациялоонун негизинде гликозилтрансферазалар үчүн жаңы жогорку натыйжалуу суюк хроматография анализи.

Анализдер β1-4 галактозилтрансферазанын (ГалТ-1) жана α2-6 сиалилтрансферазанын (ST-6) экөөнүн тең активдүүлүгүн жогорку натыйжалуу суюктук менен өлчөө үчүн 2-аминобензой кислотасынын (2AA; антранил кислотасы, АА) уникалдуу маркировкалоо химиясын колдонуу менен иштелип чыккан. Флуоресценцияны аныктоо менен хроматография (HPLC).N-Acetylglucosamine (GlcNAc) жана N-acetyllaktosamine акцепторлор жана uridine diphosphate (UDP) -галактоза жана cytidine monophosphate (CMP) -N-acetylneuraminic кислотасы (NANA) үчүн донор катары GalT-1 жана ST-6, тиешелүүлүгүнө жараша колдонулган.Ферменттик продуктулар AA менен in situ маркаланган жана нормалдуу фазалык шарттарды колдонуу менен TSKgel Amide 80 мамычасында субстраттардан бөлүнгөн.Фермент бирдиктери Gal-β1-4GlcNAc жана NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc менен бирге туунду стандарттарга салыштыруу аркылуу чоку аймактардан аныкталган.Анализдердин сызыктуулугу (убакыт жана ферменттин концентрациясы), тактык (интра жана аралык анализ) жана кайталануучулук белгиленген.Анализдер изоляция жана тазалоо учурунда ферменттердин активдүүлүгүн көзөмөлдөөдө пайдалуу экени аныкталган.Анализдер өтө сезгичтүү жана салттуу радиоактивдүү кантка негизделген өлчөөлөргө барабар же жакшыраак аткарылган.Анализ форматы башка трансферазалардын активдүүлүгүн өлчөө үчүн да колдонулушу мүмкүн, эгерде карбонгидрат акцепторлорунун этикеткалоо үчүн азайтуучу учтары бар болсо.IgG аркылуу гликопротеиндердин акцепторлорунун анализи иштелип чыккан.IgG гликандарын (биантеннардык G0, G1, G2, моно- жана дисалиляцияланган) бөлүү үчүн кыска HPLC профилдөө ыкмасы иштелип чыккан, бул GalT-1 жана ST-6 активдүүлүгүн тез аныктоого жардам берген.Мындан тышкары, бул профилдөө ыкмасы клиникалык шарттарда IgG гликандардагы өзгөрүүлөргө мониторинг жүргүзүү үчүн пайдалуу болушу керек.