Продукциялар

X-gal (ошондой эле 5-бромо-4-хлоро-3-индолил-β-D-галактопиранозид үчүн BCIG кыскартылган) - алмаштырылган индол менен байланышкан галактозадан турган органикалык кошулма.Бул кошулма 1964-жылы Жером Хорвиц менен бирге иштегендер тарабынан синтезделген. Расмий химиялык аталыш көбүнчө бромохлориндоксил галактозид сыяктуу так эмес, бирок анча оор эмес фразалар үчүн кыскартылат.Индоксилден алынган X X-гал жыйрылышынын X булагы болушу мүмкүн.X-gal көбүнчө молекулярдык биологияда кадимки максаттуу β-галактозиддин ордуна фермент, β-галактозидаза бар экендигин текшерүү үчүн колдонулат.Ал гистохимия жана бактериологияда бул ферменттин активдүүлүгүн аныктоо үчүн да колдонулат.X-gal - фермент-катализделген гидролиздин натыйжасында индиго боёкко окшош эрибеген көк кошулмаларды берген көптөгөн индоксил гликозиддердин жана эфирлердин бири.

X-gal лактозанын аналогу болуп саналат, ошондуктан D-лактозада β-гликозиддик байланышты ажыратуучу β-галактозидаза ферменти тарабынан гидролиздениши мүмкүн.X-гал, β-галактозидаза менен бөлүнгөндө, галактоза жана 5-бромо- 4-хлоро-3-гидроксииндол - 1 пайда болот. Акыркысы өзүнөн-өзү димеризацияланып, 5,5'-дибромо-4,4'-дихлорага чейин кычкылданат. -индиго - 2, эрибей турган интенсивдүү көк продукт.X-gal өзү түссүз, ошондуктан көк түстүү продуктунун болушу активдүү β-галактозидазанын бар экендигин текшерүү үчүн колдонулушу мүмкүн.Бул ошондой эле бактериялык β-галактозидазаны (lacZ деп аталат) ар кандай тиркемелерде кабарчы катары колдонууга мүмкүндүк берет.

Эки гибриддик анализде β-галактозидаза бири-бири менен өз ара аракеттенген белокторду аныктоо үчүн кабарчы катары колдонулушу мүмкүн.Бул ыкмада геномдук китепканалар ачыткы же бактериялык системаны колдонуу менен белоктун өз ара аракеттенүүсү үчүн текшерилиши мүмкүн.Экрандалып жаткан протеиндердин ортосунда ийгиликтүү өз ара аракеттешүү бар жерде, бул активдештирүү доменинин промоутерге туташуусуна алып келет.Эгерде промотор lacZ гени менен байланышкан болсо, анда X-gal катышуусунда көк пигменттүү колониялардын пайда болушуна алып келген β-галактозидазаны өндүрүү, демек, белоктордун ортосундагы ийгиликтүү өз ара аракеттенүүнү көрсөтөт.Бул ыкма 106дан аз өлчөмдөгү китепканаларды скрининг менен чектелиши мүмкүн. X-галдын ийгиликтүү бөлүнүшү индолдун туруксуздугуна байланыштуу байкалаарлык жагымсыз жыт жаратат.

X-gal өзү түссүз болгондуктан, көк түстөгү продуктунун болушу активдүү β-галактозидазанын бар экендигин текшерүү үчүн колдонулушу мүмкүн.

Активдүү ферменттин бул оңой идентификациясы βгалактозидаза генин (lacZ гени) ар кандай колдонмолордо кабарчы ген катары колдонууга мүмкүндүк берет.