Продукциялар

5-fluorouracil (5-FU) жана эки эндогендик монофосфат нуклеотиддердин бир нече метаболиттерин атайын сандык аныктоо үчүн биз суюк хроматография-тандем масс-спектрометриясына (LC-MS/MS) негизделген оригиналдуу ыкманы иштеп чыктык.Бул анализ төмөнкүнү аныктоого мүмкүндүк берди: (i) 5-FU же 5-фтор-2′-дезоксиуридинден (5-FdUrd) 5-фтор-2′-дезоксиюридин-5′-монофосфаттын (5-FdUMP) клетка ичиндеги өндүрүшүн , (ii) 5-FdUMP концентрациясынын клетка ичиндеги 2′-дезоксиуридин-5′-монофосфат (dUMP)/тимидин-5′-монофосфат (TMP) катышына тийгизген таасири жана (iii) 5-FdUMP жана секрециянын көлөмү 5-FU ABC транспортерлери менен адамдын маданияттуу клеткаларынан.Биздин эксперименталдык шарттарда клеткалар 5-FU же 5-FUrd менен инкубацияланган.Андан кийин, клеткалык белоктор метанол менен тундурулган.Бул процедура жогорку экстракцияны калыбына келтирүүнү камсыз кылды.Мындан тышкары, клеткалардан 5-FU жана 5-FdUMP секрециясын өлчөө үчүн, биз маданият чөйрөсүндө бул молекулалардын санын аныктоону жүргүздүк.Медиа түздөн-түз инъекцияланган (5-FU) же Oasis Wax экстракция картриджинин (5-FdUMP) жардамы менен катуу фазалык экстракциядан өттү.Аналиттерди бөлүү dC18 Atlantis 3,5 мкм, (100 мм × 2,1 мм id) мамычасында изократикалык режимде аммоний форматтык буфер/метанол/суу (5/5/90, к/к) мобилдик фаза катары колдонулду.Иштөө убактысы 6,2 мүнөттөн ашкан эмес.Аналиттер терс ион режиминде электроспрей интерфейсинде иондоштурулган.Биз кошулмаларга ылайык 2,5–150 нг мл -1 диапазонунда ыкманы тастыктадык.Жети күндүн ичинде анализдин ичиндеги жана аралык өзгөргүчтүк 10% дан төмөн болгон.Үлгүлөр -20 °Cде эки жумадан кем эмес сакталганда жана үч тоңуу-эрүү циклинен кийин бардык кошулмалар клеткаларда же маданий чөйрөдө туруктуу болгон.Эки медиада тең матрицалык эффект байкалган эмес.